武汉异硫氰酸胍

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蛋白酶K的生产及使用

信息来源: http://hbjxdgc.com/ 作者:湖北玖丰隆化工有限公司 发布时间:2022-02-07 13:48

  武汉蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶。蛋白酶K可降解天然蛋白质,不但广泛用于分子生物学和细胞生物学等领域的相关实验,而且在食品、农业、医药等领域的应用也与日俱增。


  蛋白酶K的生产途径:


  目前,蛋白酶K主要通过两种途径制得,一种是直接从真菌中直接提取,另外一种是通过基因重组后表达。


  真菌发酵纯化法:蛋白酶K来源于林伯氏白色念球菌,从真菌中提取的方法就是以林伯氏白色念球菌为出发菌株,然后经60Goγ射线诱变及原生质体紫外诱变,采用特定的培养基,经液态深层发酵生产蛋白酶 K。


  基因改造法:通过合成与扩增获得蛋白酶K基因,然后通过克隆,转化,将蛋白酶K基因整合到酵母染色体上,通过酵母的筛选,选出能够高效表达目标蛋白的优质菌株,利用高密度发酵技术,进行高密度发酵表达蛋白酶K,然后经过蛋白质的分离纯化,获得高纯度高活性蛋白酶K。


  使用蛋白酶K的注意事项:


  1. 蛋白酶K稳定性强,在变性剂尿素、SDS等溶剂中能够保有较高活性,但它是一种丝氨酸蛋白酶,广谱的丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)能特异性结合到丝氨酸蛋白酶的活性丝氨酸残基,抑制蛋白酶 K活性;


  2. 蛋白酶K本身是一种蛋白质,虽然具有高活性和高稳定性,但也会受到温度、pH值、保存环境和时间的影响,因此,为保证蛋白酶K活性,需将蛋白酶K冻干的干粉在0~4℃保存,或溶液状态下于-20℃保存。蛋白酶 K溶液为无色透明,如果出现沉淀则不能再使用。



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